Giáo hoàng Nicôla V thành lập thư viện ở Vatican năm 1448 bằng việc phối hợp khoảng 350 sách chép tay bằng tiếng Hy Lạp, tiếng Latinh và tiếng Hebrew kế thừa từ các Giáo hoàng tiền nhiệm, chung với bộ sưu tập sách riêng của ông và tích cực thu mua, trong số đó có các thủ bản (bản chép tay) từ thư viện Constantinopolis. Thư viện tòa thánh Vatian (Biblioteca Apostolica Vaticana) chính thức được thành lập năm 1475.[1]

Khi người quản thủ thư viện đầu tiên - Bartolomeo Platina - lập bản danh mục sách của thư viện vào năm 1481, thì thư viện có trên 3.500 đầu sách. Khoảng năm 1587, giáo hoàng Xíttô V trao nhiệm vụ cho kiến trúc sư Domenico Fontana xây một tòa nhà mới cho thư viện, hiện vẫn đang sử dụng. Các sách được trưng trên các kệ dài được kê liền thành từng dãy.